泛素化结果图(1) -底物蛋白的降解 环球快讯

来源:个人图书馆-读博可以毕业哒   2023-07-02 16:32:43


(资料图)

CHX和MG132处理检测底物蛋白的降解

环己酰亚胺(Cycloheximide, CHX)为细胞内蛋白合成抑制剂。MG132为蛋白酶体抑制剂。图3中,相对于MG132未处理组中SUBSTRATE蛋白在各时间点无明显变化,MG132处理组中的SUBSTRATE蛋白在2h、4h、8h的水平明显减小。说明SUBSTRATE的降解与蛋白酶体相关。

图3 用CHX和MG132处理细胞,在0h、2h、4h、8h时间点分别收细胞并裂解,用对应的抗体IB检测底物蛋白和内参

E3泛素连接酶能够促进底物蛋白的降解

图4中,随着E3泛素连接酶表达量的增加,底物蛋白的表达水平相应降低。图5中,随着E3泛素连接酶酶活性失活突变表达量的增加,底物蛋白的表达水平无明显变化。图6中,用E3泛素连接酶的siRNA敲低细胞内E3泛素连接酶的表达水平,底物蛋白的表达水平相应增加。图7中,过表达E3泛素连接酶酶,底物蛋白的半衰期减少。图8中,敲低E3泛素连接酶酶,底物蛋白的半衰期增加。说明E3泛素连接酶能降低底物蛋白的表达水平。

图4 梯度过表达E3泛素连接酶,24-48小时后收细胞并裂解,用对应的抗体IB检测E3泛素连接酶、底物蛋白和内参
图6 敲低E3泛素连接酶,24-48小时后收细胞并裂解,用对应的抗体IB检测E3泛素连接酶、底物蛋白和内参