(资料图)
CHX和MG132处理检测底物蛋白的降解环己酰亚胺(Cycloheximide, CHX)为细胞内蛋白合成抑制剂。MG132为蛋白酶体抑制剂。图3中,相对于MG132未处理组中SUBSTRATE蛋白在各时间点无明显变化,MG132处理组中的SUBSTRATE蛋白在2h、4h、8h的水平明显减小。说明SUBSTRATE的降解与蛋白酶体相关。
E3泛素连接酶能够促进底物蛋白的降解
图4中,随着E3泛素连接酶表达量的增加,底物蛋白的表达水平相应降低。图5中,随着E3泛素连接酶酶活性失活突变表达量的增加,底物蛋白的表达水平无明显变化。图6中,用E3泛素连接酶的siRNA敲低细胞内E3泛素连接酶的表达水平,底物蛋白的表达水平相应增加。图7中,过表达E3泛素连接酶酶,底物蛋白的半衰期减少。图8中,敲低E3泛素连接酶酶,底物蛋白的半衰期增加。说明E3泛素连接酶能降低底物蛋白的表达水平。